微生物及其真菌毒素分析
发布时间:2018-12-19 来源: 作者: 浏览:0

真菌毒素检测方法详述
目前真菌毒素检测常用的方法如下几种:
一、薄层层析法:
TLC法是针对不同的样品,用适宜的提取溶剂将霉菌毒素从样品中提取出来,经柱层析净化,再在薄层板上层析展开、分离,利用霉菌毒素的荧光性,根据荧光斑点的强弱与标准比较测定其最低含量。TLC法样品前处理繁琐,且提取和净化效果不够理想,提取液中杂质较多,在展开时影响斑点的荧光强度。
二、色谱法:
色谱法,包括薄层色谱、气相色谱、液相色谱等,一直是最重要的真菌毒素的化学分析方法。现在比较普遍的真菌毒素的分析方法还是液相色谱法,包括液相色谱-质谱联用技术。该法快速而准确,但需要昂贵的仪器设备,仅限于专业检测机构获得科研和调查分析、监测使用,未能在企业及基层广泛推广使用,而且其结果的滞后效应大大降低了对生产实际的指导效果。
三、免疫化学检测法: (胶体金免疫层析法,酶联免疫吸附法)
免疫学检测方法是基于抗体与抗原或半抗原之间的选择性反应而建立起来的一种生物化学分析法。通常具有高的选择性和很低的检出限,广泛用于各种抗原、半抗或抗体的测定,一般可分为荧光免疫法、发光免疫法、免疫法及电化学免疫法等非放射免疫法和放射免疫法,其中在饲料霉菌毒素检测中应用较广的主要是酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金免疫层析法。
免疫学检测方法由于其快速、灵敏、准确、可定量、操作简便、无需贵重仪器设备,且对样品纯度要求不高等特性,特别适用于饲料厂、粮油/食品加工厂、养殖场等企业进行原料或成品的检测以及工商质监部门现场检测。
该类方法有以下特点:
1) 灵敏度高
2) 干扰小:抗体抗原的免疫反应特异性很强,结构类似物、荧光物质、有色物质对检测的干扰很小。
3) 操作简便快捷:由于特异性强,简化了样品的预处理和提取纯化过程,同时操作步骤也非常简便,测定时间也短。
4) 安全性高,污染少,成本低廉:不需要昂贵的测定仪器,所用试剂也相对较少,特别是因为灵敏度高,毒素标准品的浓度可以很低,减少了对检测人员和环境的潜在危害和污染。
几种检测真菌毒素方法特点对比表
常用方法        薄层层析法        色谱法        胶体金免疫层析法        酶联免疫吸附法
检测操作        繁琐        繁琐        简单        简单
是否定量        目测半定量        定量        定性        定量
敏感性        差        高        高        高
提取效率        低        高        高        高
仪器设备        设备简单        设备昂贵        简单设备        简单设备
样本前处理        繁琐        繁琐        简单        简单

几种真菌毒素快速检测方法对比

方法名称        优点        局限性        适用单位
胶体金快捷型–直接法        1、简便快速,5分钟出结果 
2、样品处理时间非常短
3、携带方便,适用基层
4、可以单个样品逐一检测,不需要做曲线
5、无需复杂设备和专业知识,操作人员5分钟即可学会,即学即用
6、室温保存,保存期长        1、定性检测,只判断超不超标,不给具体数据 
2、检测样品范围较窄,不能测含油较多的样品
3、用于提取的溶剂为甲醇,有一定的毒性
4、检测高灵敏度时稳定性弱于胶体金精准型
         a.饲料生产加工企业 
b.粮食谷物粗加工企业
c.工商质监部门用于快速筛查
d。畜禽养殖户自查
 
 
胶体金精准型–萃取复溶法        1、与HPLC法对照,准确性非常好,有权威检测中心验证报告 
2、检测样品范围非常广,凡是可能污染真菌毒素的样品(包括油类),均可用于检测
3、整个操作过程所使用的试剂均无毒无害
4、样本中毒素提取回收率高且稳定
5、样品本身颜色对检测结果影响小
6、可以通过调整稀释倍数准确地检测多个浓度梯度,可实现半定量检测
7、操作较简单,一般操作人员半小时即可学会,即学即用
8、室温保存,保存期长        1、定性检测,只判断超不超标,不给具体数据 
2、操作时间比快捷型长
3、操作步骤多于快捷型
4、一张试纸只能测一份样品
 
 
 
         a.粮油制品生产加工企业 
b。食品加工贸易企业
c.香料调味品生产加工企业
d。食用油生产企业
e.国家/省市县级粮油监督检测中心(站)
f.工商质监部门用于市场快速筛查
g。饲料生产加工企业
h。其他需检测真菌毒素的行业
酶联免疫试剂盒Elisa        1、准确定量,有权威机构验证报告 
2、批量样品,一次检测
3、采用直接竞争法,步骤简单
4、灵敏度高于胶体金法,检测范围广
5、检测值基本不受样品底色干扰        1、操作较复杂,需要专业人员操作 
2、保存温度有限制,保存期一年
3、不适合基层现场检测
4、检测样品范围较窄,对于含油较多的样品,需另行设计样本处理方法
         a.食品相关分析实验室 
b.粮油监测检测中心
c.有条件的粮油饲料生产加工企业
 
 

以上两表对比了各种方法的优缺点以及各种单位最实用的检测方法分析,希望能对关注霉菌毒素的企业和单位有所帮助,但是同行业也可以从经济成本和样品不同要求出发也有可以找到最适合自己企业适用的检测方法。
下表中针对食品和饲料行业中不同的原料推荐了相应的初筛方法,
食品行业黄曲霉毒素初筛方法
饲料行业黄曲霉毒素初筛方法
品名        推荐检测方法        品名        推荐检测方法
        胶体金快捷型—直接检测法        胶体金精准型–萃取复溶法        酶联免疫试剂盒Elisa                胶体金快捷型—直接检测法        胶体金精准型–萃取复溶法        酶联免疫试剂盒Elisa
玉米及其制品                 P                 玉米                 P         
花生及其制品                 P                 大豆、豆粕        P                 P
食用油                 P                 其他饲料        P                 P
粮食发酵酒                 P                                             
谷物(大米、小米、小麦、燕麦、黑麦、荞麦、高粱等)        P                 P                                    
调味品(辣椒粉、胡椒粉等)                 P                                             
酱油、醋                 P                                             
坚果类                 P        P                                    
冷冻类速食品                 P           

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